红细胞裂解液对CD34+细胞相对计数的影响及其原因初步探讨

作者：詹茜; 万雪颖; 程伟; 崔瑾; 张阳丽; 秦璐; 戴玉莲; 张玉洪^*

来源：重庆医科大学学报, 2019, 44(09): 1229-1234.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.001769

• 红细胞裂解液
• FACS裂解液
• Optilyse C裂解液
• CD34+细胞百分比

目的:研究红细胞(red blood cell,RBC)裂解液对CD34+细胞相对计数的影响。方法:收集101份外周血干细胞采集物,CD34-PE及CD45-FITC双色免疫荧光染色后,分别用FACS裂解液(FACSTM lysing solution,FACS)、Optilyse C裂解液(optilyse C lysing solution,Optilyse C)及自配裂解液溶解红细胞,采用洗涤程序和运用ISHAGE设门策略,检测CD34+细胞、淋巴、粒、单核细胞相对数,CD45+细胞占全部收集信号百分比及各类细胞前向散射光(forward scatter,FSC)及侧向散射光(side scatter,SSC)信号。结果:比较3种裂解液处理后样本的CD34+细胞百分比,FACS裂解液处理的样本CD34+细胞百分比最低,自配裂解液最高(FACS vs. Optilyse C vs.自配=0.49±0.43 vs. 0.67±0.50 vs. 0.73±0.66,P=0.000)。FACS裂解后样本CD45+细胞百分比远高于Optilyse C及自配裂解液(t=142.500,P=0.000)。3种裂解液对淋巴细胞百分比结果(F=35.340,P=0.000)具有统计学差异;而粒细胞百分比(F=0.610,P=0.540)、单核细胞百分比(F=1.590,P=0.210)差异无统计学意义。FACS裂解液处理后,CD34+细胞、淋巴细胞的FSC和SSC信号强度均弱于Optilyse C裂解液及自配的裂解液;而粒、单核细胞的SSC信号,FACS裂解液处理后最强,Optilyse C裂解液处理后最弱。另外,动员后的白细胞数多少与CD34+细胞百分比不存在相关性(r=0.108,P=0.312)。结论:红细胞裂解液导致CD34+细胞相对计数差异的原因可能与CD45+细胞比例有关,即获取的有效细胞数;裂解液对细胞形态的影响与造成淋巴细胞比例有显著性差异有关。鉴于不同红细胞裂解液对CD34等抗原阳性细胞的相对计数确实有不良影响,因此在应用流式细胞术检测或计数时应慎重选择。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院