一种基于连续PMCA的PrP~(Sc)体外扩增方法的建立

作者：石崧; 董辰方; 张宝云; 石琦; 王桂荣; 王新; 韩俊; 董小平

来源：病毒学报, 2008, (04): 282-286.

DOI：10.3321/j.issn:1000-8721.2008.04.007

• Prion病
• PrPSc
• PrPC
• 蛋白质错误折叠循环扩增

为建立一种基于蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)的体外稳定扩增方法以观察PrPSc是否能在体外连续传代,我们分别制备了正常仓鼠和羊瘙痒病因子263K感染的发病仓鼠的全脑匀浆,将两种脑匀浆以不同体积比混合后,分别进行144个循环的直接PMCA和每轮48个循环、共8轮的连续PMCA,用Western blot对PrPSc的扩增情况进行检测。结果显示,与常规的直接PMCA方法相比,连续PMCA能更有效地使低浓度的PrPSc扩增到可检出的水平,表明连续PMCA可以支持羊瘙痒因子263K在体外长期稳定的复制。连续PMCA方法是一种体外高效地扩增PrPSc的方法,有潜力成为一种Prion体外培养方法,用于研究Prion错误折叠和复制机制,以及检测脑组织、外周组织和体液样品中的微量PrPSc。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室