Kruppel样转录因子6介导Bel7404、Huh7细胞中谷氨酰胺酶2通路的肿瘤增殖调控

作者：阳德全; 郑希彦; 史宪杰; 王少平^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(06): 1093-1097.

DOI：10.3760/cma.j.cn421213-20210325-00253

• 肝癌细胞
• 谷氨酰胺酶
• 细胞增殖
• 染色质免疫共沉淀

目的探讨Kruppel样转录因子6(KLF6)基因调控谷氨酰胺酶2(GLS2)对人肝癌细胞系Bel7404、Huh7增殖的影响。方法采用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测正常肝细胞和肝癌细胞中KLF6的mRNA和蛋白表达(上海细胞库)。沉默KLF6基因, 细胞计数试剂盒(CCK-8)和细胞增殖实验(EdU)检测细胞增殖;结合前期实验基础、转录因子结合位点数据库(JASPAR)辅助筛选KLF6结合GLS2结合序列;染色质免疫共沉淀(CHIP)验证转录因子KLF6结合GLS2的序列;qPCR、Western blot检测沉默KLF6, GLS2的mRNA和蛋白的表达量。结果 KLF6在人肝癌细胞系HepG2(0.12±0.01)、HepG3B(0.11±0.02)、BEL-7404(0.44±0.02)、Huh7(0.34±0.03)中mRNA表达低于正常细胞HL7702(1.00±0.01), 具有统计学意义(t=172.80、113.90、61.64、44.41, P<0.01);Western blot检测KLF6在HepG2(0.57±0.02)、HepG3B(0.53±0.01)、BEL-7404(0.73±0.01)、Huh7(0.66±0.01)中蛋白表达水平低于HL7702, 差异有统计学意义(t=37.79、42.17、31.40、40.13, P<0.01);沉默KLF6基因, CCK-8检测Huh7在0、24、48、72 h增殖能力(0.20±0.01、0.30±0.01、0.45±0.04、0.63±0.02)高于对照组(0.20±0.01、0.29±0.01、0.35±0.03、0.47±0.01), 差异有统计学意义(F=43.46, P<0.01);CCK-8检测Bel7404在0、24、48、72 h增殖能力(0.20±0.01、0.27±0.01、0.42±0.02、0.62±0.04)高于对照组(0.20±0.01、0.26±0.01、0.36±0.01、0.44±0.02), 差异有统计学意义(F=141.40, P<0.01);EdU检测Huh7中3个不同抑制剂sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3增殖率(56.83%、52.68%、45.43%)高于对照组(35.32%), 差异有统计学意义(t=6.68、4.10、3.86, P<0.01);同理检测Bel7404中3个不同抑制剂增殖率(53.61%、49.32%、42.16%)高于对照组(32.75%), 差异有统计学意义(t=3.48、2.89、2.31, P<0.01);沉默KLF6基因, Huh7细胞在3种不同抑制剂sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3中GLS2的mRNA表达(0.01±0.00、0.13±0.01、0.44±0.02)低于对照组(1.01±0.01), 差异有统计学意义(t=94.63、23.54、27.04, P<0.01);实验组蛋白表达(0.41±0.01、0.64±0.10、0.87±0.02)低于对照组(1.00±0.01), 差异有统计学意义(t=15.11、9.57、3.88, P<0.01);Bel7404细胞在sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3中GLS2的mRNA表达(0.04±0.01、0.29±0.10、0.33±0.02)低于对照组(1.00±0.01), 差异有统计学意义(t=30.21、21.82、20.92, P<0.01);实验组蛋白表达(0.36±0.01、0.66±0.10、0.72±0.02)低于对照组(1.00±0.01), 差异有统计学意义(t=59.99、36.50、21.80, P<0.01)。结论 KLF6介导的GLS2调控途径显著抑制肝癌细胞的增殖。

• 单位
  中山大学附属第八医院