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摘要
目的 探讨miR-148a-3p在体外牙齿发生中成骨分化和牙釉质发育中的作用，揭示其分子机制。方法 获取人牙髓干细胞和口腔上皮细胞。将人牙髓干细胞转染miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p抑制剂或阴性对照。通过在Matrigel基质凝胶上接种人牙髓干细胞并覆盖口腔上皮细胞，建立三维共培养系统。采用MTT实验评估miR-148a-3p对共培养细胞增殖和蛋白表达的影响，采用Western blotting实验检测成骨细胞分化（RUNX2）和牙釉质发育标志物（E-cadherin）蛋白表达水平，采用荧光素酶报告实验验证SMURF2(SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶2)与miR-148a-3p的相互作用。结果 在人牙髓干细胞中使用抑制剂下调miR-148a-3p后，3D共培养中的细胞活力降低（P <0.05）。使用模拟物上调miR-148a-3p后，共培养中成骨标志物RUNX2和牙釉质发育标志物E-cadherin的表达增加（P <0.05）。TargetScan软件预测miR-148a-3p在SMURF2的3’-UTR中有结合位点。荧光素酶报告实验表明miR-148a-3p mimics抑制野生型载体的荧光素酶活性（P <0.05），同时Western blot结果显示miR-148a-3p mimics下调SMURF2的表达（P <0.05）。结论 miR-148a-3p可能通过靶向SMURF2，调控RUNX2和E-cadherin的表达，参与了人牙髓干细胞成骨分化和上皮细胞牙釉质发育。为牙齿修复和治疗提供了潜在的治疗靶点。
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