不同保存温度和反复冻融次数对鸭疫里默氏杆菌DNA的影响

作者：刘嘉; 苗小猛; 徐景峨^*; 陶宇航; 蒲龄; 杨莉; 张亚楠; 李婷; 余波; 赵滨; 杨粤黔

来源：江西农业学报, 2021, 33(05): 83-89.

DOI：10.19386/j.cnki.jxnyxb.2021.05.013

• 鸭疫里默氏杆菌
• 荧光定量PCR
• 温度
• 冻融次数
• DNA

为探究不同保存温度和反复冻融次数对鸭疫里默氏杆菌DNA的影响,研究了不同保存温度和反复冻融次数对不同浓度梯度组鸭疫里默氏杆菌DNA样品浓度及荧光定量Ct值的影响。根据OmpA基因保守序列设计了鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR特异性引物,产物大小为112 bp,退火温度为56℃。荧光定量循环阈值Ct值随DNA浓度的下降而升高。常温保存的DNA样品7 d后出现明显降解,保存温度为4、-20、-80℃时则对荧光定量PCR检测效率影响不大。较高浓度的A、B组DNA样品Ct值未受冻融次数的影响,而浓度较低的C、D组则在冻融21次后Ct值明显升高。研究建立了鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR鉴定方法,Ct值随DNA浓度的下降而升高,DNA样品应低于4℃保存,低浓度DNA应避免反复冻融。