长链非编码RNA LINC00657作为ceRNA促进肝癌细胞的增殖和迁移

作者：叶蓓玮; 韩辉; 曹鹏博; 秦庚; 李海北; 周钢桥^*

来源：军事医学, 2018, 42(10): 736-765.

• LINC00657
• 癌,肝细胞
• 细胞增殖
• 细胞运动
• 转染
• RNA,信使
• 竞争性内源RNA
• 肿瘤发生

目的研究长链非编码RNA(lncRNA) LINC00657在肝细胞癌(肝癌,hepatocellular carcinoma,HCC)中所发挥的生物学功能,明确LINC00657在肝癌中的表达情况及其与预后的关系。方法通过慢病毒包装方法将稳定干扰LINC00657的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染进肝癌细胞株Bel-7402和Hep G2细胞系,筛选得到稳定干扰LINC00657的肝癌细胞系;采用瞬时转染pc DNA3. 1(+)-LINC00657质粒方法建立过表达LINC00657的Bel-7402细胞系;采用CCK-8、平板克隆和细胞迁移(Transwell)实验检测敲低和过表达LINC00657对细胞生长和迁移能力的影响;利用RNA pull-down实验确认LINC00657是否可直接吸附miR-194;采用qRT-PCR和Western印迹实验(WB)检测敲低LINC00657后miR-194靶基因的mRNA和蛋白水平变化;采用Log-rank检验比较LINC00657高表达组和低表达组肝癌患者的生存期差异。结果 LINC00657可显著促进肝癌细胞的增殖和迁移能力;与LINC00657的突变体序列相比,其野生型序列可显著富集miR-194;在敲低LINC00657的细胞中,miR-194的靶基因THBS1的mRNA和蛋白表达水平均显著下调;来自TCGA的数据分析显示,LINC00657高表达与肝癌患者的不良预后显著相关。结论 LINC00657可通过吸附miR-194上调凝血酶敏感蛋白(THBS1)的表达,从而促进肝癌细胞的生长和迁移。