鼠艾滋病病毒荧光定量PCR标准品RNA的构建

作者：葛文华; 何金洋

来源：热带医学杂志, 2009, (04): 392-394+353.

• 鼠艾滋病病毒
• RNA病毒
• 逆转录聚合酶链反应 friend leukemia virus (FLV)
• RNA virus
• reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)

目的合成构建鼠艾滋病病毒(FLV)荧光定量检测标准品,明确核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则。方法通过序列对比,找到FLV最为保守的区段作为RNA标准品的合成目标,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所得的PCR产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,最后用PCR和电泳检测验证。结果成功合成了FLV荧光定量PCR标准品。结论FLV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①选择保守序列;②设计引物时将潜在的终止密码或起始密码排除在PCR目标产物之外;③将启动子(如T7启动子)挂在适当的引物上,保...

• 单位
  广州中医药大学; 广州中医药大学热带医学研究所