抗MRSA-PBP2a卵黄抗体的制备及酶联寡聚核苷酸吸附试验的建立

作者：孙誉芳; 李宁; 孟祥英; 王彰骄; 张羽飞; 乔晋娟^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(01): 55-59.

DOI：10.13350/j.cjpb.190111

• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
• 青霉素结合蛋白2a
• 卵黄抗体
• 酶联寡聚核苷酸吸附试验

目的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法。方法用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,BCA法测定蛋白浓度,Western blot分析其特异性;以IgY抗体为捕获分子,以生物素标记的PBP2a特异性适配体为检测分子,建立检测MRSA的ELONA方法;对IgY包被量、生物素标记适配体用量及HRP标记链霉亲和素稀释度进行优化,测定该方法的灵敏度、特异性和重复性。结果成功表达和纯化PBP2a蛋白,Western blot显示IgY抗体能特异识别PBP2a蛋白。建立了检测MRSA的ELONA方法,其最佳包被用IgY稀释度为1∶1 600,生物素标记适配体用量为400nmol/L,HRP标记链霉亲和素稀释度为1∶2 000。优化的ELO-NA对MRSA的检测限为2.87×102 CFU/ml;重复性试验的变异系数为4.7%。用该方法检测34株临床分离的金黄色葡萄球菌,与梅里埃VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析结果一致性为100%。结论制备的抗MRSA PBP2a卵黄抗体具有较高特异性,基于该抗体建立的ELONA方法灵敏、特异、重复性好,可用于MRSA PBP2a的检测。

• 单位
  潍坊医学院