微小RNA-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白基因抑制胃癌细胞增殖和侵袭迁移的实验研究

作者：王琦; 周围; 蒋敬庭^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(07): 1291-1295.

• 微小RNA
• 胃癌
• RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白(RMP)基因对人胃癌细胞SGC-7901恶性增殖和侵袭迁移的影响及其作用机制。方法筛选SGC-7901细胞株行后续实验, 分别建立稳定过表达或敲减RMP和miR-598-3p的SGC-7901细胞株。采用溴脱氧尿苷(BrdU)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力, 平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力, 划痕实验检测细胞迁移能力, Transwell实验检测细胞侵袭能力, 双荧光素酶报告基因法分析miR-598-3p的结合靶点, 蛋白质印迹法(Western blot)检测相关通路相关蛋白表达水平, 两样本间比较使用t检验。结果稳定过表达和敲减RMP或miR-598-3p的SGC-7901细胞株建立成功。敲减RMP能显著降低SGC-7901的增殖能力, BrdU(8.867±1.159比26.030±3.630, t=7.704, P<0.01), CCK-8(0.560±0.052比1.020±0.107, t=6.708, P<0.01), 迁移能力(336.000±21.070比252.700±36.120, t=3.452, P<0.05), 侵袭能力(36.330±7.371比127.300±10.690, t=12.140, P<0.01)。过表达RMP能显著提高SGC-7901细胞的增殖能力, BrdU(56.400±6.560比24.800±4.423, t=6.918, P<0.01), CCK-8(2.105±0.142比1.028±0.110, t=10.350, P<0.01), 迁移能力(131.300±20.110比257.000±29.140, t=6.148, P<0.01), 侵袭能力(347.700±41.140比135.000±17.690, t=8.226, P<0.01)。生物信息学预测miR-598-3p与RMP的3’端非编码区(3’UTR)位点结合, 并通过双荧光素报告系统验证。过表达或敲减miR-598-3p能分别降低和提高SGC-7901细胞株的增殖、迁移及侵袭能力, 而RMP的回复表达能挽救miR-598-3p引起的细胞增殖、侵袭及迁移的抑制。miR-598-3p通过靶向RMP抑制p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k1)/凋亡蛋白(Bad)和核因子-κB(NF-κB)通路发挥功能。结论 miR-598-3p靶向RMP基因抑制p70s6k1/Bad和NF-κB通路降低SGC-7901细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。

• 单位
  苏州大学附属第三医院; 苏州大学