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摘要
目的探讨白细胞介素-12(IL-12)对干燥综合征(SS)小鼠肝脏的损伤作用及其机制。方法选取12周龄C57BL/6小鼠、非肥胖型糖尿病(NOD)SS模型小鼠、IL-12基因敲除NOD小鼠各5只, 分别纳入正常对照组、SS模型组和IL-12 KO NOD组。各组小鼠取外周静脉血分离提取外周血单个核细胞(PBMC)和血清, 处死小鼠解剖获取颌下腺组织和肝脏组织。(1)取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织制备石蜡切片, HE染色观察肝脏肝小叶结构, MASSON染色观察肝脏纤维化情况。(2)取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织、颌下腺组织的石蜡切片免疫组织化学染色观察比较IL-12阳性细胞光密度(OD)值的改变。(3)采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常对照组、SS模型组小鼠PBMC和肝脏组织IL-12 mRNA的相对表达量, 以及正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠肝脏组织纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原(Col1)mRNA的相对表达量。(4)取正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠外周血血清和肝脏组织, 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、转铁蛋白(TRF)、转铁蛋白受体(TFR)蛋白的表达情况。结果 (1)HE染色可见正常对照组小鼠肝小叶结构基本正常, 而SS模型组小鼠肝脏的肝小叶、肝索结构紊乱, 肝细胞胞浆内有空泡出现。MASSON染色可见SS模型组小鼠肝脏组织中见弥漫不规则的染为蓝色的胶原纤维, 正常对照组小鼠肝组织中染为蓝色的胶原纤维则少见。(2)正常对照组小鼠颌下腺和肝脏IL-12阳性细胞OD值分别为0.08±0.01、0.03±0.01, 高于SS模型组的8.74±0.78、2.58±0.07, 差异均有统计学意义(t=24.82、80.64, P值均<0.001)。(3)正常对照组小鼠肝脏组织及PBMC中IL-12 mRNA表达分别为1.07±0.15、1.03±0.14, 均低于SS模型组的3.00±0.50、3.01±0.57, 差异均有统计学意义(t=8.27、7.54, P值均<0.001)。与正常对照组比, SS模型组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均增高, 差异均有统计学意义(P值均<0.001);与SS模型组比较, IL-12 KO NOD组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均降低, 差异均有统计学意义(P值均<0.05);3组间Col1 mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P=0.243)。(4)与正常对照组比较, SS模型组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF蛋白相对表达量均明显降低, TFR蛋白相对表达量均增高, 差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与SS模型组比较, IL-12 KO NOD组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF的相对表达量均增加, 血清TFR蛋白的相对表达量降低, 差异均有统计学意义(P值均<0.05);而肝脏组织中TFR蛋白的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-12表达增高对SS小鼠肝脏组织的损伤起到了促进作用, 其机制可能与增高的IL-12诱导肝脏细胞铁死亡有关。
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