H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立

作者：刘天强; 于海; 张强; 李国新; 王斌; 童光志

来源：中国预防兽医学报, 2008, (10): 795-799+823.

• H3N2亚型猪流感病毒
• 血凝素基因
• 原核表达 H3N2 subtype swine influenza virus (SIV)
• HA gene
• prokaryotic expression

采用RT-PCR扩增H3N2亚型猪流感病毒HA1基因。将该片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中,构建原核表达载体pET-HA1。阳性质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,HA1基因获得表达,其重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定表达HA1基因的最佳诱导条件。Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性。用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,阳性标准初步判定为:待检血清OD值>0.4,而且待检血清OD值/阴性血清OD值>2。应用此方法对...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室