短发夹RNA沉默TRPV2基因抑制大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变的实验研究

作者：李琰; 孔建军; 祝聪聪^*

来源：中国骨与关节杂志, 2020, 9(08): 626-631.

• 脊柱侧凸
• 髓核
• 椎间盘
• 离子通道

目的利用短发夹 RNA (shRNA) 技术构建 TRPV2 基因的沉默表达慢病毒载体,探究其在大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变中的作用。方法本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧凸模型构建的方法。根据基因沉默干扰原理,构建 shRNA TRPV2 干扰载体,根据实验目的,将 SD 大鼠分成对照组、模型组和 shRNA 组。对上述动物模型摄 X 线片,对椎间盘髓核组织进行 HE 染色,对椎间盘髓核组织进行 II 型胶原蛋白和 Aggrecan 蛋白的免疫组织化学染色,利用 RT-PCR 和 Western blot 检测髓核组织中炎性因子 iNOS、COX-2、MMP-9 和凋亡因子 Caspase-6、Caspase-3 和 Caspase-9 的 mRNA 和蛋白表达水平。结果慢病毒量转染效率较高,为 (92.3±2.7) %。对照组 SD 大鼠无明显侧凸,模型组 SD 大鼠脊柱向左侧凸,Cobb’s角为(31.22±2.18) °;shRNA 组 SD 大鼠脊柱向左侧凸,Cobb’s角为 (18.07±3.09) °。RT-PCR 结果显示,模型组髓核组织中炎性因子 iNOS、COX-2、MMP-9 和凋亡相关因子 Caspase-3,6,9 的 mRNA 表达水平均高于对照组 (P<0.05);shRNA 组各组分的 mRNA 表达水平均高于对照组 (P<0.05);shRNA 组髓核组织中 iNOS、COX-2、MMP-9、Bad、Bax 和凋亡相关因子 Caspase-3,6,9 的 mRNA 表达水平均低于模型组 (P<0.05)。Western blot 蛋白检测结果与 RT-PCR 结果相同。HE 染色显示,模型组大鼠椎间盘髓核组织分布紊乱无序,还有纤维断裂。shRNA 组大鼠髓核组织有瘢痕愈合,也有正常的髓核组织,排列有序。免疫组织化学染色结果显示,shRNA 组髓核组织中 II 型胶原蛋白和 Aggrecan 蛋白的蛋白表达水平均高于模型组 (P<0.05)。结论shRNA-TRPV2 可以抑制脊柱侧凸鼠模型中髓核细胞的凋亡,降低髓核组织中 iNOS 以及炎性因子 COX-2 和 MMP-9 的表达,对髓核组织的退变起到保护作用。

• 单位
  邢台医学高等专科学校; 冀中能源邢台矿业集团有限责任公司总医院