牛腺病毒5型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：安微; 陈世界; 王史; 张婧; 杨苗; 薛昌华; 余姓鸿; 林华^*

来源：畜牧与兽医, 2019, 51(08): 101-104.

• 牛腺病毒5型
• Hexon基因
• TaqMan探针
• 荧光定量PCR

建立针对牛腺病毒5型六邻体(Hexon)基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法。根据牛腺病毒5型Hexon基因高度保守区设计引物和TaqMan探针,绘制标准曲线,对其灵敏度、特异性、重复性进行验证,建立牛腺病毒5型实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法。结果显示,构建的重组质粒pUC57-BAV5,标准曲线在102～107拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.975 2,建立检测方法的最低检测限为32拷贝/μL;应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒无交叉反应;重复性试验表明,同一浓度的20个平行样品的变异系数为1.4%。牛腺病毒5型TaqMan探针荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可以用于牛腺病毒5型的快速、准确的检测。

• 单位
  海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心