基于GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对高糖合并LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的影响

作者：彭岚玉; 姚敬心; 李钰佳; 李定祥; 刘迅; 邓奕辉^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 1-12.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231638

• 人脐静脉内皮细胞
• 炎性损伤
• 左归降糖通脉方
• G蛋白偶联受体43
• 核转录因子-κB

目的：探讨左归降糖通脉方(ZJTP)对高糖合并脂多糖(LPS)损伤后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响及作用机制。方法：通过细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平确定LPS最适损伤浓度及作用时间、ZJTP含药血清的最佳作用浓度。将HUVECs分为空白对照组、模型组、ZJTP含药血清组、短链脂肪酸(SCFAs)混合液组。采用ELISA检测内皮素1(ET-1)、一氧化氮(NO)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和TNF-α的含量；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测G蛋白偶联受体43(GPR43)、β-抑制蛋白2(β-arrestin-2)、核因子κB抑制因子α(IκBα)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达；免疫荧光染色法(IF)观察NF-κB p65入核情况。运用小干扰核糖核酸(siRNA)的方法观察GPR43在炎性损伤调控中的作用。将干扰后的细胞分为空载体组、ZJTP含药血清组、Si-GPR43组、Si-GPR43+ZJTP含药血清组。ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-ɑ含量；Western blot检测通路蛋白表达；IF观察NF-κB p65入核情况。结果：最适造模条件为1μg·mL-1 LPS作用24h；最佳药物干预条件为5%的ZJTP含药血清作用24 h。与空白对照组比较，模型组ET-1含量明显升高，NO含量明显下降(P<0.01)；炎症因子水平明显上升(P<0.01)；GPR43和IκBα蛋白表达量明显下降，β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量明显升高(P<0.01)；NF-κB p65蛋白由核外转移至核内(P<0.01)。与模型组比较，ZJTP含药血清组ET-1含量下降，NO含量升高(P<0.05)；炎症因子水平下降(P<0.05)；GPR43和IκBα蛋白表达升高，β-arrestin-2和NF-κB p65表达下降(P<0.05)；NF-κBp65由核外转移至核内的数量减少(P<0.01)。机制研究发现，与Si-GPR43组比较，ZJTP含药血清干预后IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显下降(P<0.01)；GPR43和IκBα蛋白表达量明显上升(P<0.01)，β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量明显下降(P<0.01)；NF-κB p65由核外转移至核内数量减少(P<0.01)。结论：ZJTP对高糖合并LPS诱导炎性损伤的HUVECs具有保护作用，其机制可能与调控GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路有关。

• 单位
  湖南中医药大学