乙型肝炎病毒X蛋白促进磷脂酶A2受体表达加重足细胞焦亡的机制

作者：冯墨宣; 安茜; 余亚妮; 陈月琪; 杨小倩; 李保爽; 蒋伟^*

来源：中华医学杂志, 2023, 103(22).

• 肾炎
• 肝炎病毒, 乙型
• 乙型肝炎病毒相关性肾炎
• 磷脂酶A2受体
• 焦亡

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导足细胞膜上M型磷脂酶A2受体(PLA2R)表达增加对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)中足细胞焦亡的影响及其作用机制。方法采用转染HBx基因至人肾脏足细胞内的方法模拟HBV-GN发病过程, 并将足细胞分为以下8组:正常对照+分泌型磷脂酶A2-ⅠB(sPLA2-ⅠB)组、空白质粒+sPLA2-ⅠB组、HBx组、HBx+sPLA2-ⅠB组、HBx+sPLA2-ⅠB+PLA2R对照siRNA组、HBx+sPLA2-ⅠB+PLA2R-siRNA组、HBx+sPLA2-ⅠB+ROS对照siRNA组及HBx+sPLA2-ⅠB+ROS-siRNA组。电镜下观察足细胞形态, 荧光显微镜下利用免疫荧光染色观察足细胞膜上PLA2R的表达, 流式细胞术分析足细胞焦亡率及活性氧(ROS)表达, 实时荧光定量PCR及Western 印迹测定PLA2R、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18 mRNA及蛋白的表达情况。结果与正常对照组相比, 体外转染HBx质粒后足细胞膜上M型PLA2R表达增加(4.07±0.41比1.01±0.17, P<0.001), 电镜及胱天蛋白酶荧光染料抑制物/碘化丙啶(FLICA/PI)双染细胞焦亡检测提示过表达的PLA2R与其配体sPLA2-ⅠB结合后足细胞损伤加重, 焦亡程度增加(20.22%±0.36%比7.86%±0.28%, P<0.001), 且PLA2R过表达时ROS(4 324 515±222 764比12 920±46, P<0.001)、NLRP3(48.30±2.73比1.00±0.11, P<0.001)、ASC(4.02±0.84比1.01±0.15, P<0.001)、caspase-1(3.99±0.42比1.00±0.11, P<0.001)、IL-1β(9.08±0.75比1.00±0.09, P<0.001)及IL-18(19.20±0.70比1.00±0.02, P<0.001)表达水平增加。相反, 加入PLA2R-siRNA或ROS-siRNA敲低相关物质表达后, 足细胞损伤减轻, 焦亡程度下降, 下游信号通路相关基因NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18基因表达均减少(均P<0.01)。结论 HBx可能通过上调PLA2R靶向ROS-NLRP3信号通路促进HBV-GN中足细胞焦亡。

• 单位
  青岛市中心医院; 青岛大学附属医院