海马神经元原代培养与纯度鉴定方法的优化

作者：张学平; 王高华; 王惠玲; 刘忠纯; 郭鑫

来源：武汉大学学报(医学版), 2013, (05): 703-706+710.

DOI：10.14188/j.1671-8852.2013.05.004

• 海马神经元
• 无血清原代培养
• 神经元培养 Hippocampal Neurons
• Serum-Free Primary Culture
• Neuronal Culture

目的:通过优化和改进传统的神经元培养方法,探讨一个简单、高纯度的大鼠胚胎海马神经元的原代培养及活性检测方法。方法:颈椎脱臼处死孕鼠,迅速取海马,剥离血管网等结缔组织后,消化并吹打制成细胞悬液,以适当的密度接种入DMEM/HG培养基,4h后换用Neurobasal培养基,以后每2-3d进行1/3量换液。倒置显微镜观察神经元的形态变化,并采用CCK-8试剂盒检测神经元活性和神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定神经元纯度。结果:细胞接种4h后贴壁,随着培养时间的延长神经元的形态发生一系列变化,从圆形、透亮、体积小逐渐变为椭圆形、三角形或椎形,有光晕,胞体增大,突起伸长且分支增多,在培养第4天后逐渐连接...

• 单位
  杭州市第七人民医院; 武汉大学人民医院