Nogo-66受体RNA干扰质粒的构建及其干扰效率鉴定

作者：范有明; 蔡明春

来源：第三军医大学学报, 2007, (13): 1285-1288.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2007.13.006

• Nogo-66受体
• RNA干扰
• 质粒

目的构建及筛选高效率针对Nogo-66受体(Nogo-66receptor,NgR)进行RNA干扰(RNAi)的质粒。方法RT-PCR克隆NgR,插入表达质粒中,构建NgR-GFP融合蛋白表达质粒。根据NgR序列,设计4对针对NgRmRNA进行RNAi的寡核苷酸。退火后,插入短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达质粒中,构建shRNA表达质粒。将NgR-GFP融合蛋白表达质粒与shRNA表达质粒共转染AAV-293细胞。通过对GFP表达量的观察及Westernblotting定量检测NgR-GFP融合蛋白表达量,鉴定shRNA表达质粒对NgR的干扰效率。结果针对NgR进行RNAi的4个序列中,有1个序列的干扰效率大于90%以上。结论成功构建了1个针对NgR的高效RNAi表达质粒。

• 单位
  香港中文大学; 汕头大学; 中国人民解放军陆军军医大学