hTNFα/CHO基因工程细胞的构建及其分泌蛋白功能的检定

作者：田磊; 潘静坤; 施明; 薛毅珑

来源：局解手术学杂志, 2016, 25(04): 240-243.

• 基因工程细胞
• 人肿瘤坏死因子
• 转染
• 蛋白分泌

目的构建能够持续分泌人肿瘤坏死因子(h TNFα)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)基因工程细胞h TNFα/CHO细胞系,并且观察其分泌功能的变化。方法应用载体GV141构建携带h TNF基因表达的质粒;采用脂质体转染法,经G418筛选稳定转染细胞株;通过Real-Time PCR鉴定其基因表达,采用ELIAS法鉴定其蛋白分泌情况。结果经序列比对,证明GV141-h TNFα表达载体构建成功,Real-Time PCR证明转染细胞系包含h TNFα目的基因,ELIAS鉴定结果证明该细胞系可以在一定代数稳定持续内分泌h TNFα。结论构建的h TNFα/CHO细胞系可以在一定代数内稳定持续地分泌人肿瘤坏死因子。

• 单位
  解放军总医院; 军事医学科学院基础医学研究所