半夏凝集素蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA的建立

作者：谢雨薇; 郁红礼^*; 吴皓^*; 陶兴宝; 王贺鹏; 程砚秋; 王彩霞; 曾平; 刘冰冰; 张萍; 崔小兵

来源：中国中药杂志, 2022, 47(22): 6076-6081.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20210414.302

• 半夏
• 凝集素蛋白
• 单克隆抗体
• 双抗夹心ELISA

为测定半夏及其炮制品中内源性毒性物质半夏凝集素蛋白(Pinellia ternata lectin, PTL)的含量，该文采用杂交瘤细胞技术制备PTL特异性单克隆抗体，并建立了PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法，检测条件为：捕获抗体工作浓度为2.5μg·mL-1,检测抗体稀释倍数为1∶450,包被条件为4℃过夜，封闭时间、抗原及检测抗体孵育时间均为90 min,辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase, SA-HRP)孵育时间为15 min。该方法对PTL抗原的定量限为0.375 ng·mL-1;线性范围为75.000～4 800.000 pg·mL-1,R2=0.997 1;加样回收率在90.0%～110.0%;试验内和试验间精密性变异系数分别在2.0%～3.0%、2.0%～8.5%。采用该方法测定3批半夏及其炮制品中PTL含量，测得半夏中PTL质量分数均值为35.42 mg·g-1,其炮制品清半夏、法半夏、姜半夏中PTL质量分数均值分别为1.15 mg·g-1、16.53μg·g-1和122.63 ng·g-1,表明炮制后PTL含量显著下降。该文建立的PTL抗原定量双抗夹心ELISA检测方法线性较好，反应灵敏，准确度高，为半夏炮制过程中PTL含量检测提供一种简便有效的监测方法。

• 单位
  南京中医药大学; 中国食品药品检定研究院