重叠延伸PCR克隆三孢布拉霉carRA基因及其功能活性检测系统的构建

作者：汤晖; 石楠; 于淼; 刘龙; 刘静; 贾颖; 牛宏彦; 张利平

来源：生物工程学报, 2011, (07): 990-997.

DOI：10.13345/j.cjb.2011.07.016

• 重叠延伸PCR
• carRA基因
• 番茄红素环化酶
• 八氢番茄红素合成酶 PCR-driven overlap extension
• carRA gene
• lycopnene cyclase
• phytoene synthase

三孢布拉氏霉菌CarRA蛋白,既有番茄红素环化酶功能活性又有八氢番茄红素合成酶功能活性,为了对CarRA蛋白进行双功能活性分析,及探测CarRA蛋白的番茄红素环化酶功能活性位点,构建了在大肠杆菌体内通过颜色互补检测两种酶活性的系统。通过重叠延伸PCR的方法克隆得到了carRA基因,并构建原核表达载体pET28a-carRA,与携带crtI/crtB/crtE基因簇的质粒pAC-LYC共转化BL21(DE3),验证番茄红素环化酶功能活性;与以pAC-LYC为基础构建的携带crtI/crtE基因簇的质粒pAC-LYC△(crtB)共转化BL21(DE3),验证八氢番茄红素合成酶功能活性。通过颜色互...

• 单位
  河北大学