微小RNA-27b-3p与基质金属蛋白酶13在人软骨细胞的对应关系

作者：李兴; 李震; 肖方骏; 翁家贤; 潘建科; 何沛恒; 苏海涛

来源：中华关节外科杂志(电子版), 2022, 16(4): 431-440.

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-134X.2022.04.008

• 骨关节炎
• 微RNAs
• 基质金属蛋白酶类
• NF-κB
• 丝裂原激活蛋白激酶类

目的:探讨微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)与基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在人软骨细胞表达及其靶向对应关系。方法:运用蛋白质印迹法(WB)与实时定量PCR技术(qRT-PCR)明确miR-27b-3p与MMP13在正常和骨关节炎(OA)人软骨细胞的表达。利用不同浓度的白介素(IL)1β干预原代人软骨细胞24 h，或利用不同时间点的IL-1β(10 ng/ml)干预原代人软骨细胞。利用原位杂交、转染及双荧光素酶报告技术确定miR-27b-3p与MMP13的靶向对应关系；结合运用核转录因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂评估其作用机制。两组资料比较采用独立样本t检验，多组资料比较采用单因素方差分析，LSD法多重比较检验。结果:WB、qRT-PCR和原位杂交检测结果显示，与正常软骨相比，OA软骨中miR-27b-3p表达降低(t＝5.07，P<0.01)，MMP13表达升高(t＝－6.31，P<0.01)。IL-1β干扰后的结果显示miR-27b-3p表达降低(F＝129.54，P<0.05)，MMP-13表达升高(F＝394.50，P<0.05)。通过TargetScan数据库和荧光素酶报告基因检测结果分析，野生型-MMP13组荧光素酶活性降低(F＝55.27，P<0.001)，突变型-MMP-13荧光素酶活性变化没有统计学意义(P＝0.654)。利用特异性MAPK信号抑制剂和NF-kB抑制剂干预IL-1β诱导软骨细胞模型结果提示，与对照组相比，抑制剂组的MMP13表达水平降低(F＝28.43，P<0.001)，miR-27b-3p表达水平增高(F＝35.04，P<0.001)。结论:miR-27b-3p在OA软骨细胞呈现低表达，并负向调控MMP13的表达，其作用机制可能是通过NF-κB和MAPK信号通路，这结果提示这miR-27b-3p可能作为OA诊断与治疗的潜在靶点。