左归降糖解郁方对自噬介导的糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经血管单元中神经元损伤的保护作用及其机制

作者：刘检; 刘林; 唐林; 韩远山; 杨蕙; 凌佳; 龙红萍; 蔺晓源; 王宇红^*

来源：中草药, 2019, 50(10): 2420-2427.

• 左归降糖解郁方
• 糖尿病并发抑郁症
• 神经血管单元
• 海马神经元
• 自噬
• 凋亡
• GluR2/Ca2+/mTOR信号通路

目的探讨左归降糖解郁方(ZGF)对自噬介导的糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠海马神经血管单元(neurovascularunit,NVU)中神经元的保护作用及其机制。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,并进行免疫细胞化学染色鉴定。采用高糖(150mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预制备海马NVU细胞模型,实验设对照组、模型组、空白血清对照组和ZGF含药血清组。采用Furo-3/AM染色法检测海马NVU神经元细胞内钙水平,高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)检测海马NVU神经元细胞内自噬标志物自噬相关蛋白1(Beclin-1)、人微管相关蛋白轻链3II(LC3-II)及谷氨酸受体2(Glu R2)/Ca2+/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路关键蛋白的表达,TUNEL染色法观察各组海马神经元细胞凋亡。结果与对照组比较,模型组及空白血清对照组海马NVU神经元细胞内钙水平显著升高,自噬标志物Beclin-1、LC3-II蛋白表达水平显著升高,Glu R2、m TOR蛋白表达水平显著降低,AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)蛋白表达水平显著升高,且细胞凋亡明显增多;与模型组比较,ZGF含药血清组海马NVU神经元细胞内钙水平明显降低,自噬标志物Beclin-1、LC3-II蛋白表达水平降低,GluR2/Ca2+/mTOR信号通路中Glu R2、m TOR蛋白表达水平升高,AMPK蛋白表达水平降低,同时细胞凋亡显著减少。结论 ZGF对自噬介导的DD大鼠海马NVU神经元细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制与调控GluR2/Ca2+/mTOR信号通路及细胞凋亡有关。

• 单位
  湖南中医药大学; 湖南中医药大学第一附属医院