串联杂种泛素结合结构域蛋白(ThUBD)在大肠杆菌中的可溶性高效表达

作者：罗维佳; 邓晨; 李衍常; 高媛; 徐平

来源：军事医学, 2016, 40(10): 795-818.

• ThUBD
• 泛素化蛋白
• 大肠杆菌
• 密码子优化
• 融合表达
• 蛋白质组学

目的提高人工串联杂种泛素结合结构域蛋白(tandem hybrid UBD,Th UBD)在大肠杆菌中的可溶性表达量,为泛素化蛋白研究提供高效特异的富集方法。方法根据大肠杆菌同义密码子相对频率(RFSC)表对大肠杆菌的密码子进行分类,计算Th UBD密码子的相对适应度,并根据分析结果对Th UBD的密码子进行优化;诱导表达和蛋白定量检测密码子的优化结果;亲和纯化及泛素化蛋白富集研究检测密码子优化后的Th UBD-S的Ub C结合能力。结果根据分析结果优化Th UBD密码子,使得适于大肠杆菌基因表达的密码子从48%增加到75%,并消除了阻碍转录翻译的密码子,其密码子适应指数(CAI)从0.63升高到0.88。密码子优化后的Th UBD其可溶性蛋白Th UBD-S的表达量增加了4倍,达到总蛋白的13.06%。同时,优化后的Th UBD-S可能具有更高的Ub C的结合能力。结论 Th UBD的基因序列经过优化后,其在大肠杆菌中的表达量升高4倍左右。同时,序列优化不影响融合蛋白Th UBD在大肠杆菌中的可溶性表达和结合Ub C的能力。

• 单位
  北京蛋白质组研究中心; 蛋白质组学国家重点实验室; 安徽医科大学