抗除草剂大豆GE-J12实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：曹英芳; 赵新; 刘双; ***; 刘娜; 徐石勇; 高芳瑞; 马卉; 兰青阔; 檀建新; 王永^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(07): 146-152.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-1330

• 实时荧光定量PCR
• GE-J12转化体
• 特异性序列

GE-J12是中国农业科学院研发的转G2-EPSPS基因和GAT基因的抗除草剂大豆新品系。根据抗除草剂大豆GE-J12品系外源基因插入位点5'端转化体特异性序列设计引物和探针，经引物探针筛选、特异性测试、反应体系和程序优化、标准曲线构建、检测极限和定量极限测试等试验，建立了基于TaqMan水解探针的实时荧光定量PCR检测方法。该方法特异性强、准确度高，在RSD小于25%的情况下检测极限为0.032%，定量极限为0.16%，线性度大于0.992，经5%、3%和1%定值样品测试，与真实值平均偏差为2.87%-16.67%。可用于转基因耐除草剂大豆GE-J12转化体特异性序列含量的精准定量，为GE-J12大豆新品系的检测提供了新方法。

• 单位
  天津市农业科学院; 河北农业大学; 安徽省农业科学院水稻研究所