基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路的羟基红花黄色素A抑制血管紧张素II诱导的血管外膜成纤维细胞迁移研究

作者：李伟慷; 崔清卓; 郑玉光; 张一昕; 郭炳颜; 赵京山^*; 刘琳^*

来源：中草药, 2023, 54(05): 1478-1486.

• 羟基红花黄色素A
• 血管外膜成纤维细胞
• 血管紧张素II
• 脂多糖
• TLR4/NF-κB/NLRP3通路

目的 基于通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)通路探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)抑制血管紧张素II(angiotensin II,ANG II)诱导的血管外膜成纤维细胞（vascular adventitial fibroblasts,VAFs）迁移作用。方法 组织贴块法培养大鼠胸主动脉VAFs，免疫荧光实验检测细胞中Vimentin和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）蛋白表达，鉴定VAFs。设置对照组、ANG II组、HSYA组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组和LPS+HSYA组，对照组VAFs给予培养基正常培养，其余各组给予1×10-7 mol/L ANG II处理24 h，然后更换为含100 nmol/L LPS或40μmol/L HSYA的培养基，继续培养24 h，划痕实验检测VAFs的迁移能力；CCK-8法检测细胞活力；Western blotting检测TLR4、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达；免疫荧光实验检测NLRP3炎性小体相关蛋白NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)及凋亡斑点样蛋白（apoptotic spot-like protein,ASC）共表达情况。结果 免疫荧光结果证实VAFs培养成功。划痕实验结果显示，ANG II能够显著增加细胞的迁移率（P<0.01）,LPS刺激进一步提高VAFs的迁移率（P<0.01）,HSYA能够抑制ANG II及LPS对VAFs迁移的促进作用（P<0.01）。Western blotting结果显示，ANG II显著提高细胞内TLR4和p-NF-κB的表达（P<0.05、0.001），并促进NF-κB入核（P<0.001）;HSYA显著抑制ANG II诱导的细胞内TLR4和p-NF-κB的表达（P<0.05、0.01、0.001），并抑制NF-κB入核（P<0.05、0.01、0.001）。免疫荧光实验结果表明，ANG II及LPS促进NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、Caspase-1及ASC共表达，HSYA可减少ANG II及LPS诱导NLRP3、Caspase-1及ASC蛋白共表达，抑制NLRP3炎症小体的组装。结论 HSYA通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减少ANG II诱导的VAFs迁移。

• 单位
  河北中医学院; 基础医学院; 河北医科大学