双特异性磷酸酶8通过与促分裂原活化蛋白激酶1相互作用调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖 凋亡

作者：张锌; 南鹤^*; 李爽

来源：中华风湿病学杂志, 2022, 26(07): 433-1.

• 关节炎, 类风湿
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 双特异性磷酸酶8
• 促分裂原活化蛋白激酶1

目的探讨RA-成纤维样滑膜细胞(FLS)中双特异性磷酸酶8(DUSP8)DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)1之间的相互作用, 及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法培养RA-FLS和正常FLS, 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术, 构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖, 流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位, 免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 DUSP8在RA-FLS mRNA[(2.4±0.6)和(11.2±0.8), t=21.63, P<0.001]和蛋白表达[(0.24±0.04)和(0.74±0.08), t=9.45, P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比, 在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[(90.5±5.6), (92.5±1.8), (56.4±4.4), F=138.60, P<0.001], 增加细胞凋亡率[(12.7±1.4)%和(12.6±1.3)%和(27.5±3.0)%, F=16.98, P<0.001], 上调细胞的DUSP8’’[(0.49±0.05), (0.45±0.04)和(0.73±0.07)]、Bax[(0.39±0.06), (0.36±0.05)和(0.89±0.10)]蛋白表达水平, 下调ki-67[(1.07±0.12)和(1.11±0.16)和(0.70±0.08)]、p-MAPK1/MAPK1[(0.59±0.06)和(0.65±0.07)和(0.39±0.03)]蛋白表达水平(均P<0.001);与空白对照组和沉默对照组相比, 在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[(90.5±5.6)和(91.1±2.9)和(128.3±4.6), F=137.50, P<0.001], 降低细胞凋亡率[(12.7±1.4)%和(13.2±1.2)%和(5.4±0.7)%, F=16.98, P<0.001], 下调细胞中的DUSP8[(0.492±0.048)和(0.432±0.051)和(0.102±0.024)]、Bax[(0.391±0.062)和(0.411±0.058)和(0.090±0.011)]蛋白表达水平, 上调ki-67[(1.07±0.12)和(1.11±0.15)和(1.93±0.22)]、p-MAPK1/MAPK1[(0.59±0.06)和(0.68±0.06)和(0.93±0.11)]蛋白表达水平(均P<0.05)。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达, 免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。结论 DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化, 抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖, 并促进凋亡。

• 单位
  吉林大学中日联谊医院