质粒DNA实验室规模化制备工艺

作者：贲培玲; 陈容前; 孙淼; 施向阳

来源：山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报, 2023, 44(03): 202-208.

• 质粒DNA
• 响应面
• 实验室规模发酵
• 纯化
• 质量评价

目的 探索实验室规模生产质粒DNA(plasmid DNA,pDNA)的制备工艺。方法 选用质粒pEGFP-N1E. coli Stbl3菌株，用最陡爬坡试验（plackett-burman,PB）筛选出影响质粒产量最显著因素，响应面法优化重组菌高产发酵条件。采用碱裂解，浓缩质粒，通过凝胶、亲和、离子等层析分离纯化pDNA，并对所纯化的pDNA进行质量评价。结果 用PB试验和响应面试验设计筛选出的关键因素是：酵母提取物20 g/L，甘油6 g/L，接种物浓度吸光度（optical density,OD）=0.014。在最佳条件下进行3次平行发酵，生物量OD 600达28.07±2.01，质粒产量（21.34±1.31）mg/L。pDNA纯度（A260 nm/A280 nm）为1.91±0.02。内毒素含量小于0.005 EU/g DNA；几乎检测不到蛋白质及细菌基因组DNA残留，达到相关质量标准。结论 本研究采用的制备工艺可生产出高质量的p DNA。

• 单位
  滁州城市职业学院