犬弓首蛔虫TcCPG1的表达及其与几丁质的结合特性

作者：***; 李芳; 尹莎莎; 江艾耘; 周荣琼^*

来源：畜牧兽医学报, 2020, 51(02): 356-364.

• 犬弓首蛔虫
• CPG1
• 原核表达
• 几丁质结合

为探讨犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)软骨素蛋白多糖TcCPG1的表达特征及其与几丁质的结合方式,为犬弓首蛔虫软骨素蛋白多糖的功能研究提供依据,笔者克隆T.canis软骨素蛋白多糖1基因(Tc-cpg-1)并原核表达重组蛋白TcCPG1,采用镍柱亲和层析技术对重组蛋白进行纯化,并与几丁质进行结合试验;采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)进行Tc-cpg-1基因的转录水平的性别和组织差异表达分析。结果显示:Tc-cpg-1基因编码区(coding sequence, CDS)的长度为1 251 bp,共编码417个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白TcCPG1以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为70 ku;对表达条件进行优化后,以0.8 mmol·L-1 IPTG于16℃诱导14 h时可获得大量目的蛋白;利用镍柱亲和层析纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白,与几丁质进行结合试验,验证了重组蛋白TcCPG1能够与几丁质结合;通过qRT-PCR对Tc-cpg-1基因转录水平的组织差异性进行分析,发现Tc-cpg-1在雌虫中高量表达,尤其在雌虫的生殖组织中表达量最高,表明Tc-cpg-1可能参与了T.canis雌虫的生殖过程,推测TcCPG1可能通过与卵壳中几丁质的相互作用从而影响T.canis的胚胎和生殖发育过程。

• 单位
  动物科学学院; 西南大学