羊流产嗜性衣原体重组ompA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

作者：付明哲; 吴浩阳; 许信刚; 张琪^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(11): 2184-2189.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.16

• 羊流产性衣原体
• ompA蛋白
• 原核表达
• 间接ELISA

原核表达羊流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,C.abortus)ompA蛋白,包被ompA蛋白抗原,筛选反应条件,成功建立了血清抗体ELISA检测方法。PCR扩增ompA蛋白基因并进行原核表达,经纯化、复性和Western blot鉴定后作为包被抗原,通过反应条件筛选、灵敏性、特异性、重复性检验和临床样品检测,创建了羊流产嗜性衣原体血清抗体间接ELISA检测方法。结果表明,建立pET-28α-ompA阳性质粒并表达约为40 000的ompA蛋白,Western blot显示纯化复性的ompA蛋白具备抗原性与特异性。反应条件筛选结果为ompA蛋白包被360 ng;血清及二抗分别稀释1∶50,1∶5 000并37℃作用1 h;TMB显色10 min。在优化条件下,D450≥0.327为阳性,反之为阴性;特异性、敏感性和重复性结果显示,对布氏杆菌、羊痘、羊口疮、小反刍兽疫和产气荚膜梭菌阳性血清的检测结果均为阴性且50份流产性衣原体阳性血清检出率为98%,批内和批间D450值变异系数分别为1.56%～2.56%和2.35%～3.25%。应用建立的方法对临床175份血清检测,阳性率为52%,商品化衣原体间接血凝检测阳性率为49.1%,阳性符合率为96.5%。本试验建立的间接ELISA检测方法可用于羊流产性衣原体血清抗体水平检测。

• 单位
  西北农林科技大学; 动物科技学院; 安徽农业大学