丙型流感病毒RNA标准品的制备和实时荧光定量-反转录聚合酶链反应检测方法的建立

作者：蓝雨; 赵翔; 李晓丹; 隗合江; 王大燕; 舒跃龙

来源：疾病监测, 2013, 28(07): 528-531.

• 流感病毒
• 丙型流感病毒
• 实时荧光定量-反转录聚合酶链
• 检测

目的通过分析GenBank中丙型流行性感冒(流感)病毒的序列,建立丙型流感病毒实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法,并制备丙型流感病毒的RNA标准品。方法下载GenBank中丙型流感病毒的序列,使用Beacon Designer 8软件在保守区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针。人工合成病毒HE、NP、MP和NS基因序列,克隆到pBluescriptⅡSK(+)质粒载体,进一步通过体外转录获得RNA模板,并验证检测方法的检测极限值和特异性。结果建立了针对丙型流感病毒HE、NP、MP和NS基因的快速、可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时制备了RNA标准品。结论本文建立的丙型流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法,可以在日常监测和临床鉴定中快速、准确地检测丙型流感病毒。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所