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摘要
目的观察肝再生模型中上皮细胞黏附分子(EpCAM)和转化生长因子-β(TGF-β)的动态表达。方法将35只雄性F344大鼠(Fisher344大鼠)随机分为假手术组、肝切除组(PH组)和2-乙酰氨基芴组(2-AAH/PH组),采用免疫组织化学染色法观察不同时间点EpCAM阳性细胞在肝组织中的增殖及分布;应用Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间点TGF-β和激活素受体样激酶-5(ALK-5)的蛋白表达和基因表达。结果 EpCAM阳性细胞在假手术组很难见到;PH组在术后第7天可见少量EpCAM阳性细胞,术后14 d可见阳性细胞向肝内迁移,术后21 d仅见很少量的阳性细胞;2-AAF/PH组术后7、14 d可见与PH组相似结果,但EpCAM阳性细胞明显增多且术后21 d依然可见多量的EpCAM阳性细胞。RT-PCR的结果显示:假手术组TGF-β和ALK-5三时间点的表达差异无统计学意义(TGF-β2-△△Ct值:7 d:1.00±0.00、14d:1.09±0.16、21 d:1.08±0.13,FTGF-β=0.57,PTGF-β=0.595;ALK-5 2-△△Ct值:7 d:1.00±0.00、14 d:1.10±0.14、21 d:1.07±0.16,FALK-5=0.54,P=0.610);PH组和2-AAF/PH组TGF-β和ALK-5三时间点表达差异有统计学意义(TGF-βPH组和2-AAF/PH组2-△△Ct值:7 d:8.66±0.72、7.79±0.58,14 d:5.36±0.53、4.04±0.42,21d:7.64±0.64、6.88±0.68,FTGF-βPH=21.52,PTGF-βPH=0.002,FTGF-β2-AAF/PH=35.10,PTGF-β2-AAF/PH=0.001;ALK-5 PH组和2-AAF/PH组:7 d:4.32±0.52、5.91±0.54,14 d:7.79±0.74、9.73±1.04,21 d:4.85±0.46、5.90±0.89,FALK-5PH=30.43,PALK-5 PH=0.001,FALK-52-AAF/PH=20.33,P=0.002)。Western blot的结果显示:假手术组TGF-β和ALK-5三时间点的表达差异无统计学意义(TGF-β灰度值:7d:456.4±46.8、14 d:454.8±47.1、21 d:458.8±55.6,FTGF-β=0.14,P=0.805;ALK-5灰度值:7 d:20.9±4.5、14d:21.3±7.9、21 d:22.4±6.5,FALK-5=0.42,P=0.960);PH组和2-AAF/PH组TGF-β和ALK-5三时间点表达差异有统计学意义(TGF-βPH组和2-AAF/PH组灰度值:7 d:1175.2±106.5、882.6±83.7,14 d:780.4±63.9、639.6±61.3,21d:1067.0±91.6、816.2±83.1,FTGF-βPH=6.61,P=0.009,FTGF-β2-AAF/PH=8.06,P=0.012;ALK-5 PH组和2-AAF/PH组:7d:72.9±7.0、110.1±13.1,14 d:90.1±9.4、136.9±12.5,21 d:57.8±5.6,91.8±9.7,FALK-5PH=14.05,P=0.005,FALK-52-AAF/PH=10.96,P=0.011)。结论在肝再生过程中,TGF-β表达呈现动态趋势并与EpCAM的表达趋势不同;TGF-β受体ALK-5的表达并不和TGF-β同步。
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