重组人白介素-29-Fc融合蛋白在HEK-293F细胞中的表达及体外抗肿瘤活性分析

作者：闫甲丽; 左群; 祁芳冰; 刘明杨; 刘建伟; 李素贞; 柳森; 王健^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(05): 559-565.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003903

• 重组人白介素-29
• Fc融合蛋白
• 半衰期
• 抗肿瘤活性
• 半数抑制浓度

目的 在人胚肾293F(human embryonic kidney 293F,HEK-293F)细胞中表达重组人白介素-29-Fc(recombinant human interleukin-29-Fc,rhIL-29-Fc)融合蛋白，并分析其体外抗肿瘤活性。方法 构建重组UCOE-IL-29-Fc表达质粒，瞬时转染HEK-293F细胞，经表达、纯化后获得rhIL-29-Fc融合蛋白，经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定；将rhIL-29和rhIL-29-Fc蛋白分别经左耳皮下免疫雌性日本大耳白兔，每组2只，0.5 mg/只，右耳静脉采血，分离血清，ELISA法检测半衰期；CCK-8试验检测rhIL-29-Fc蛋白对人结肠癌HT-29、人结肠癌HCT-116、人Burkkit淋巴瘤Daudi、人非小细胞肺癌NCI-H1975、人小细胞肺癌NCI-H209、人食管癌EC109和人胰腺癌PANC-1细胞的体外抗增殖效果，并计算半数抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50)。结果 重组表达质粒UCOE-IL-29-Fc经双酶切及测序鉴定证明构建正确，瞬时转染HEK-293细胞6 d后，收获培养上清，经纯化获得的rhIL-29-Fc融合蛋白相对分子质量与预期相符，蛋白浓度为1.5 mg/mL，纯度为93%，可与小鼠抗人IL-29抗体特异性结合。rhIL-29-Fc蛋白半衰期为25 h，对7种肿瘤细胞显示出不同程度的增殖抑制效应，对不同细胞的IC50也不同。结论 利用HEK-293F细胞成功表达rhIL-29-Fc融合蛋白，该融合蛋白半衰期比rhIL-29延长了20 h。根据7种肿瘤细胞显示出不同程度的体外增殖抑制效应和IC50测定结果，发现rhIL-29-Fc融合蛋白的抗肿瘤活性高于rhIL-29。该研究为IL-29蛋白治疗肿瘤的开发奠定了基础。