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摘要
目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将慢病毒质粒pLenti-TRIM69或其突变体与慢病毒辅助质粒(plp1,plp2,VSVG)共转染HEK293T包装细胞,产生有活性的病毒。包装后的重组慢病毒感染HEK293细胞,Western blot检测确认TRIM69及其突变体蛋白的表达。结果经Western blot检测证实,成功建立了稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系。结论利用慢病毒成功制备稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系,这些细胞为TRIM69生物学功能的研究提供了平台。
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单位中国医学科学院; 医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院
