HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化

作者：雷迎峰; 尹文; 杨敬; 吕欣; 韦三华; 安群星; 徐志凯

来源：科学技术与工程, 2008, (05): 1151-1155.

• 丙型肝炎病毒
• NS3/4A丝氨酸蛋白酶
• 大肠杆菌
• 蛋白表达

在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学