丹参酮ⅡA通过自噬诱导肺癌A549细胞周期阻滞的作用研究

作者：温文浩; 侯雪楠; 崔赛男; 沈崇坤; 叶然; 崔永飞; 林慧媛; 白莎莎^*

来源：中药新药与临床药理, 2020, 31(05): 539-545.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2020.05.007

• 丹参酮ⅡA
• 人非小细胞肺癌
• A549细胞
• 自噬
• 细胞周期
• Cyclin D1
• p62
• LC3B

目的观察丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TⅡA)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,探讨TⅡA诱导A549细胞自噬与细胞周期阻滞的关系。方法采用CCK8法检测TⅡA(0.5、1、2、4、8μmol·L-1)对A549细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术检测TⅡA(1、2、4μmol·L-1)对A549细胞周期分布的影响;采用Western Blot法检测TⅡA(1、2、4μmol·L-1)对A549细胞周期相关蛋白Cyclin D1和自噬相关蛋白p62、LC3B表达的影响;分别采用自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA;0.25μmol·L-1)+TⅡA(2μmol·L-1)或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol·L-1)+TⅡA(2μmol·L-1)培养处理A549细胞,然后采用Western Blot法检测细胞Cyclin D1、p62、LC3B蛋白的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期分布。结果与对照组比较,TⅡA不同浓度组对A549细胞均具有明显的增殖抑制作用(P <0.05,P <0.01),且呈时间-剂量依赖关系;药物作用12、24 h后,TⅡA的IC50值分别为7.82、2.04μmol·L-1。与对照组比较,TⅡA能降低A549细胞Cyclin D1的表达量(P <0.01),使细胞周期阻滞于G0/G1期(P <0.05,P <0.01),且呈剂量依赖性;TⅡA能够升高A549细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P <0.05,P <0.01),降低p62表达(P <0.01),诱导细胞发生自噬。与TⅡA组比较,3-MA+TⅡA组A549细胞中的LC3-Ⅱ/LC3-I比值明显降低(P <0.01),p62及Cyclin D1表达水平明显上调(P <0.01),停滞于G0/G1期的细胞比例明显减少(P <0.05)。结论 TⅡA可能通过上调人非小细胞肺癌A549细胞自噬诱导细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。

• 单位
  基础医学院; 广州中医药大学