嗜肺军团菌pip基因原核质粒的构建及其表达

作者：刘胜泉; 曹秀琴; 杨志伟

来源：宁夏医科大学学报, 2012, (01): 10-13+21.

• 嗜肺军团菌
• pip基因
• 表达
• 纯化 Legionella pneumophila
• pip gene
• expression
• purification

目的扩增嗜肺军团菌基因pip,构建重组质粒pET-pip并在原核系统中表达。方法采用PCR,从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增出pip基因,将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-pip,经限制性内切酶、PCR鉴定及测序分析后,转化BL21,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE进行鉴定。使用His-tag纯化重组蛋白PIP。结果扩增出了嗜肺军团菌726bp的pip基因,构建的原核表达重组质粒pET-pip表达并纯化出了约46kD Trx-PIP的融合蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pip基因的原核重组质粒,并在大肠杆菌中得到了高效表达。

• 单位
  宁夏医科大学; 生育力保持省部共建教育部重点实验室