大鼠肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选

作者：张方; 施毅; 辛晓峰; 刘玉秀; 宋勇; 钱桂生; 罗向东; 赵明; 李子玲

来源：解放军医学杂志, 2006, (05): 404-406.

• 受体
• 糖皮质激素
• 巨噬细胞
• 肺泡
• 基因文库
• 酵母双杂交 receptor
• glucocorticoid
• macrophages
• alveolar
• gene library
• yeast two-hybrid

目的构建脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用后的肺泡巨噬细胞(AMs)酵母双杂交cDNA文库,探寻炎症条件下与糖皮质激素受体(GR)相互作用的蛋白质分子。方法用LPS(10mg/ml)和Dex(10-5mol/L)作用于原代培养的肺泡巨噬细胞4h后,从肺泡巨噬细胞中提取总RNA,再以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的双链cDNA,后者纯化后,与线性质粒pGADT7-Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中同源重组成环形的有复制活性的cDNA文库质粒,收集在缺亮氨酸(Leu)培养板上筛选出所有克隆,即为AMs酵母双杂交文库菌。进...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 中国人民解放军东部战区总医院; 新桥医院