非洲猪瘟病毒多基因家族MGF360-13L基因功能的初步研究

作者：陈达年; 马旭升; 代军飞; 汪洋; 李茜; 白衡; 毛甜甜; 刘永生; 丁龙; 陈昊翰; 陈思言; 饶宇飞; 贾宁^*; 张杰^*; 郑海学; 刘湘涛

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(12): 4419-4428.

DOI：10.11843/j.issn.0366-6964.2022.12.027

• ASFV
• MGF360-13L
• 炎性因子
• 生长曲线测定

旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析；构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达；利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,以相同的感染复数(MOI=0.01)在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中感染基因缺失毒株和亲本毒株(ASFV CN/GS/2018)后，利用红细胞吸附试验(HAD)计算病毒滴度并绘制体外生长曲线；以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞(BMDM),利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明，MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守，编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好；构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达；成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,与ASFV CN/GS/2018相比，其体外复制没有显著性差异；在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后，IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株，并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能，这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。

• 单位
  动物科技学院; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 兰州大学; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 河北科技师范学院