大黄酸抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及机制研究

作者：邹进; 万子琳; 姚兰; 徐梦瑶; 王述蓉^*

来源：中国中药杂志, 2021, 46(23): 6204-6215.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20210816.701

• 大黄酸
• HUVECs
• 凋亡
• 自噬

该研究探讨大黄酸(rhein, RH)对过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)凋亡和自噬的影响及其潜在的作用机制。用H2O2建立HUVECs的氧化损伤模型,分成不同的处理组,MTT法检测细胞生存率,Annexin V-FITC/PI双染法、Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染法检测自噬情况;Western blot法检测蛋白表达。结果表明RH预保护细胞,可提高H2O2损伤的HUVECs的细胞存活率,且呈剂量依赖性,减少凋亡相关蛋白Bax和cleaved caspase-3的表达,升高Bcl-2的的表达,降低Bax/Bcl-2的比值;可上调自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3)-Ⅱ的表达,下调p62的表达。腺病毒转染结果显示,RH可使细胞绿色斑点和红色斑点增多,且黄色斑点也显著增多。而加入自噬抑制剂3-MA后,细胞自噬降低,凋亡增加。RH可使沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 2 related enzyme 1, SIRT1)蛋白表达增加;加入SIRT1抑制剂EX-527后,可减弱大黄酸的保护作用,细胞活力降低;加入自噬抑制剂3-MA对SIRT1蛋白的表达无影响,但加入EX-527后SIRT1、LC3-Ⅱ蛋白的表达降低,p62的表达升高。经RH处理后,磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK)的磷酸化水平升高,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin, mTOR)的磷酸化水平降低,呈剂量依赖性;且这种作用能被AMPK抑制剂compound C减弱。RH可能通过SIRT1/AMPK/mTOR通路增强自噬,减少H2O2诱导的HUVECs凋亡。

• 单位
  西南医科大学