土拉弗朗西斯菌FopA单抗阻断ELISA抗体检测方法的建立

作者：崔国林; 戚心怡; 吴村; 蔡梦雷; 张政钢; 赵东旭; 翟新国^*

来源：中国人兽共患病学报, 2023, 39(09): 850-856.

• 土拉弗朗西斯菌
• FopA
• 阻断ELISA
• 单抗
• 原核表达

目的 建立一种基于FopA单抗的阻断ELISA抗体检测方法。方法 以pET-32a为载体表达土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白，并以其免疫BALB/c小鼠制备单抗，以LVS超声裂解液为包被抗原、HRP标记FopA单抗为阻断抗体，建立直接阻断ELISA方法，利用阴性血清平均值+2SD或3SD确定该方法临界值，测定该方法特异性、敏感性、重复性及其与平板凝集试验的符合率，并利用该方法检测攻毒小鼠血清抗体变化趋势。结果 筛选获得1株稳定分泌IgG1(κ型)单抗的杂交瘤细胞，并基于该单抗建立阻断ELISA方法，包被抗原最优浓度为3μg/mL、HRP标记FopA单抗最优稀释度为1∶4 000、待检血清最优稀释度为1∶10,阴性临界值为27%、阳性临界值为41%、可疑区间为27%～41%,该方法的特异性、敏感性、重复性和符合率均良好，可检出攻毒9 d后小鼠血清抗体。结论 成功制备FopA单抗，并基于该单抗建立一种快速、准确和高通量抗体检测的阻断ELISA方法，为我国土拉弗朗西斯菌流调和防控提供技术支撑。

• 单位
  生命科学与食品工程学院; 河北工程大学