融合酶CR2-GDH合成度洛西汀前体的体系与过程调控

作者：邓陈琪; 聂尧^*; 徐岩

来源：生物加工过程, 2021, 19(02): 178-198.

• 羰基还原酶
• (S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
• 不对称转化
• 度洛西汀
• 连续过程调控

以具有高选择性的羰基还原酶(CR2)与可实现辅酶原位循环的葡萄糖脱氢酶(GDH)通过柔性连接肽得到的融合酶CR2-GDH为生物催化剂,催化N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)不对称还原合成手性药物度洛西汀重要中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺((S)-DHTP)。通过过程调控反应体系的pH,并进一步优化反应转速、底物同辅底物比例、温度及底物浓度,确定单批次反应条件:底物20 g/L、葡萄糖40 g/L、NADP+ 0.1 mmol/L及酶活7 U,恒定pH 8.4、45℃、150 r/min反应12 h,产物产率达到97.70%,对映体过量值(e.e.)≥99.9%。通过分批补料催化30 g/L底物的反应,产率达92.96%,进一步利用反应器放大体系至100 mL,实现40 g/L底物的转化反应,产率达到85.05%。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 生物工程学院; 江南大学