敲除ESR1基因对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响

作者：孙嘉慧; 栗梓仓; 李志科; 韩丹丹; 鲍树森; 曾诚; 张存

来源：生物技术通讯, 2017, 28(06): 785-788.

• CRISPR/Cas9系统
• 雌激素受体α
• 基因敲除
• 乳腺癌
• 侵袭

目的:建立CRISPR/Cas9系统用于敲除人源雌激素受体α(ERα)基因(ESR1),并利用此细胞模型初步检测ESR1基因对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:设计一个靶向人源ESR1基因第2外显子的单向导RNA(sg RNA),分别克隆表达载体后,通过慢病毒转入人乳腺癌细胞株MCF-7,Western印迹检测MCF-7中ESR1基因的敲除效果,通过Transwell、反向侵袭试验观察ESR1基因敲除后对细胞侵袭能力的影响。结果:测序结果显示靶向ESR1基因CRISPR/Cas9重组质粒构建成功;Western印迹显示Cas9-ERα组的MCF-7细胞内ERα表达水平较对照组显著降低;Tanswell、反向侵袭试验证实ESR1基因敲除能够促进乳腺癌细胞的侵袭能力。结论:通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向ESR1基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除ESR1基因;ERα能够抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。

• 单位
  肿瘤生物学国家重点实验室; 中国人民解放军空军军医大学