锤头状核酶降低小鼠胰岛细胞经CD95途径的凋亡

作者：张敏; 刘芳; 刘陵波; 童允洁; 肖娟; 仲照东; 邹萍

来源：中华器官移植杂志, 2005, 26(06): 366-369.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2005.06.015

• 核糖核酸酶类
• 抗原,CD95
• 胰岛
• 脱噬作用

目的研究锤头状核酶通过调控CD95的表达,对小鼠胰岛细胞凋亡的影响;探索提高胰岛移植物存活率的新途径。方法体外构建针对CD95mRNA93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93)和突变型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型胶原酶消化法分离小鼠胰岛细胞,通过干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素1α(IL-1α)诱导其高表达CD95后,经钠米载体-Effectene将核酶转染至该细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹检测(Westernblot)法检测胰岛细胞CD95的表达。胰岛细胞经抗CD95的抗体(JO2)作用后,以Caspase-3活性检测试剂盒检测转染前后细胞Caspase-3活性的变化;MTT法测细胞的增殖;Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,并观察了各组细胞对细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤的反应能力。结果细胞因子可诱导小鼠胰岛细胞高表达CD95分子。转染pU6-Rz93组的胰岛细胞CD95的表达与转染空载体组和转染pU6-dRz93组相比,明显下降。经JO2处理后,转染pU6-Rz93组胰岛细胞的Caspase-3活性和凋亡率明显降低,细胞增殖活性和抵抗CTL杀伤的能力显著增强。结论针对FasmRNA93位点的锤头状核酶能显著抑制小鼠胰岛细胞CD95的表达,使其免于CD95途径的凋亡;为提高胰岛移植物的存活率提供了实验基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院