牛病毒性腹泻病毒E2蛋白纳米抗体筛选及反应原性检测

作者：李岩; 肖盛中; 杨艳; 张彦红; 蔡卓轩; 周子恒; 张哲; 盛金良^*

来源：畜牧与兽医, 2021, 53(03): 71-76.

• 牛病毒性腹泻病毒
• E2
• 纳米抗体
• 噬菌体展示技术

通过噬菌体展示技术筛选牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白特异性纳米抗体,验证纳米抗体反应原性。使用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,分别在第0、21、49及70天采集全血,测得抗体效价后分离全血中淋巴细胞,提取总RNA,反转录后PCR扩增目的片段。目的片段和pCANTAB5E使用限制性内切酶酶切连接后转至TG1感受态细胞中,应用噬菌体展示技术构建VHH噬菌体展示文库。再经过3轮"吸附-洗脱-筛选"后得到与BVDV-E2结合的噬菌体,用ELISA鉴定其反应性。结果获得插入率为90.8%,库容为1.02×107 CFU/mL的文库。ELISA结果和序列分析显示,得到2条与E2蛋白具有良好反应性的纳米抗体且与VHH同源性较高的序列。研究结果为BVDV的防控和新型疫苗的研制奠定基础。

• 单位
  石河子大学; 动物科技学院