miR-199b-5p靶向Klotho对脂多糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的影响

作者：雷伟; 李爽^*; 陈海涛; 王军

来源：河北医药, 2022, 44(21): 3210-3215.

DOI：10.3969/j.issn.1002-7386.2022.21.002

• MicroRNA-199b-5p
• Klotho
• 脓毒症
• 氧化应激
• 肾小管上皮细胞
• 凋亡

目的 探究MicroRNA-199b-5p(miR-199b-5p)和Klotho在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤中的表达变化，并进一步探讨其作用机制。方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,分为正常对照组(NC组)、LPS组、inhibitor-NC组、miR-199b-5p沉默组、sh-NC组、sh-Klotho组、miR-199b-5p沉默+sh-NC组、miR-199b-5p沉默+sh-Klotho组，除NC组外，其他组采用LPS刺激建立脓毒症细胞模型，诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测细胞中miR-199b-5p、Klotho mRNA和蛋白表达水平；酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)含量；试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量；流式细胞术测定细胞凋亡率；Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3的表达。结果 与NC组比较，LPS组细胞中miR-199b-5p表达、TNF-α、IL-6水平、ROS的荧光强度、细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达显著升高(P<0.05),Klotho mRNA和蛋白表达、GSH-PX和SOD活性、Bcl-2表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较，miR-199b-5p沉默组细胞中miR-199b-5p表达、TNF-α、IL-6水平、ROS的荧光强度、细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达显著降低(P<0.05),Klotho mRNA和蛋白表达、GSH-PX和SOD活性、Bcl-2表达显著升高(P<0.05);且在沉默miR-199b-5p的基础上，下调Klotho后细胞抗氧化能力降低(P<0.05),凋亡增加(P<0.05)。结论 miR-199b-5p在LPS诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤中表达升高，沉默miR-199b-5p可能通过靶向上调Klotho的表达，增强细胞的抗氧化能力，从而减少肾小管上皮细胞凋亡。

• 单位
  华中科技大学同济医学院