摘要
目的 分析ANXA1 mRNA和蛋白在脑胶质母细胞瘤组织与正常脑组织之间的表达差异以及ANXA1在脑胶质母细胞瘤的表达,及其与脑胶质母细胞瘤患者预后的关系;体外探讨ANXA1对脑胶质母细胞瘤细胞系增殖、迁移、侵袭、凋亡能力的影响。方法 (1)从公共数据库获取脑胶质母细胞瘤组织及正常脑组织的表达数据及相应的临床数据。比较脑胶质母细胞瘤组织与正常脑组织之间ANXA1 mRNA的表达差异及ANXA1 mRNA高低表达组之间胶质母细胞瘤患者的生存时间差异。(2)通过人类蛋白质图谱公共数据库获取ANXA1蛋白在U251细胞内定位;免疫组化检测脑胶质母细胞瘤组织及其对应的癌旁组织中ANXA1蛋白的表达。(3)体外培养脑胶质母细胞瘤细胞系U87和U251,构建敲低ANXA1基因表达的小干扰RNA(ANXA1-siRNA)并转染至U87和U251细胞中。qRT-PCR和Western blot用于检测mRNA和蛋白的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和流式细胞术分别用于检测细胞增殖、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡。结果 (1)在TCGA、Rembrandt和GSE16011队列中均发现ANXA1 mRNA在胶质母细胞瘤组织中表达明显上调,差异有统计学意义(P <0.05)。另外,在这三个队列中均发现ANXA1 mRNA高表达组患者总体生存时间明显低于低表达组患者(P <0.001)。(2)qRT-PCR和Western blot的分析结果均表明与阴性对照组相比,ANXA1-siRNA组ANXA1的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P <0.001)。(3)CCK-8检测结果表明敲低ANXA1表达后,U87和U251细胞的增殖能力明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P <0.001)。Transwell细胞迁移检测结果表明:敲低ANXA1表达后U87和U251细胞的迁移能力明显低于对照组[实验组:(25.40±2.70)、(11.20±4.44);阴性对照组:(55.20±8.70)、(32.20±8.11)];细胞侵袭能力明显低于对照组[实验组:(19.60±3.21)、(12.80±4.66);阴性对照组:(43.40±5.13)、(38.6±7.37)]能力均明显低于阴性对照组,差异均有统计学意义(P <0.001)。流式细胞术检测结果显示:U87和U251细胞实验组凋亡细胞(11.84±2.50)%、(29.96±2.57)%均明显高于相应阴性对照组(7.42±2.56)%、(18.39±1.89)%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 ANXA1在胶质母细胞瘤组织中表达上调并与患者的不良预后相关。下调ANXA1基因表达能够抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,促进胶质瘤细胞的凋亡。
-
单位新乡医学院第一附属医院