奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：钟玉玲; 代邦国; 杜伟伟; 张华文; 李纯; 史怀平^*

来源：家畜生态学报, 2022, 43(02): 13-19.

• 奶山羊
• 乳铁蛋白(LF)
• 抗体制备

为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体，为进一步的试验提供材料，该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增，将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接，形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌，在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白。通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔，免疫注射结束后采集抗体血清，并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性。结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段，pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD。抗体效价达到1:107;免疫印迹试验结果显示，原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别。

• 单位
  动物科技学院; 西北农林科技大学