拟除虫菊酯降解酶基因APs实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：刘虎; 卢慧; 唐爱星; 姜伯乐; 李青云; 刘幽燕

来源：基因组学与应用生物学, 2018, 37(07): 2913-2920.

DOI：10.13417/j.gab.037.002913

• 拟除虫菊酯
• 降解酶基因APs
• 实时荧光定量PCR
• 表达量
• CT值

本研究建立了一种能够快速、灵敏地检测来源于铜绿假单胞菌GF31中拟除虫菊酯降解酶基因APs的SYBR GreenⅠ相对实时荧光定量PCR方法。通过克隆构建APs目的基因及16S rRNA内参基因重组质粒,分别制备了质粒标准品SgI-pET30a、PA-pET30a、Pep-pET30a以及16S r RNA-p ET30a;绘制标准曲线,建立了实时荧光定量PCR体系。结果显示,在质粒标准品浓度为0.00110 ng范围内,实时定量PCR标准曲线的线性关系良好,APs和16S r RNA的标准曲线R2>0.99,扩增效率=95%105%;熔解曲线呈单峰,特异性良好;扩增曲线呈S型,CT值在各梯度间均匀变化、重复性好;将建立的相对实时荧光定量PCR方法应用于检测工程菌及野生菌APs基因的m RNA表达水平,2-△△Ct法计算得工程菌SgI、PA及Pep的表达量分别为野生菌的1 898、1 314和956倍。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学; 化学化工学院