人G250真核表达载体pIRES-neo-G250的构建及表达

作者：李云奇; 朱晓明; 肖毅; 王伟; 李盼; 王宇; 王琳; 徐元基; 阎瑾琦; 张巍; 于继云; 高江平

来源：军事医学, 2013, (05): 354-357.

• G250
• 真核表达
• 质粒
• 293T细胞
• 肾肿瘤 G250
• eukaryotic expression
• plasmids
• 293T cell
• kidney neoplasms

目的构建包含人的G250真核表达载体,并将该载体转导入293 T细胞检测其表达,为构建以G250为靶点的肾癌模型提供研究基础。方法通过聚合酶链反应获得G250基因,将其连接至PMD18T过渡载体,然后克隆到载体pIRES-neo中。把构建后的重组质粒pIRES-neo-G250转染到293 T细胞,用流式细胞仪、免疫荧光和RT-PCR检测其表达。结果 PCR扩增出的G250基因测序正确,酶切鉴定重组质粒pIRES-neo-G250正确,说明质粒构建成功;流式细胞术、免疫荧光和RT-PCT检测结果表明,重组质粒pIRES-neo-G250在293 T细胞中得到表达。结论该实验成功构建了重组质粒p...

• 单位
  中国人民解放军总医院; 军事医学科学院基础医学研究所