RECK基因GFP融合蛋白真核表达载体的构建及鉴定

作者：刘利军; 扈梅; 杨向明; 申致远; 赵伟礼; 孙沫逸

来源：新疆医科大学学报, 2014, 37(04): 412-418.

• RECK基因
• 基因表达
• 质粒构建

目的使用真核表达载体pCDNA3.1,构建含有GFP蛋白标签的RECK真核表达载体,研究RECK基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用。方法使用人胚肝cDNA文库,通过聚合酶链反应扩增出带有XhoⅠ及BamHⅠ核酸内切酶位点的目的 RECK基因序列后连接入真核载体pCDNA3.1质粒中,在RECK基因序列上游通过聚合酶链反应扩增构建GFP蛋白标签。经过DNA琼脂糖凝胶电泳检测后,将GFP蛋白标签连接入真核表达载体pCDNA-RECK中。经过测序分析比对后,转化入DH5a感受态细胞后,提取质粒。使用Lipofectamine2000脂质体方法转染RECK基因入舌癌细胞系SCC-25细胞中。经过RNA提取、反转录后,通过RT-PCR及Western-blot技术鉴定RECK基因体外表达质粒转染效果及RECK蛋白表达情况。结果通过序列比对,证实了体外表达质粒与目标序列一致。将pCDNA-GFP-RECK质粒转染入真核细胞SCC-25细胞后,通过RT-PCR及Western-blot分析,验证RECK基因真核体外表达质粒能有效表达RECK基因及蛋白。结论通过分子生物学基因克隆的方法成功地在体外构建了RECK基因真核表达质粒,为研究RECK基因在口腔鳞状细胞癌转移中的机制奠定了实验基础。

• 单位
  新疆医科大学; 第四军医大学; 新疆医科大学第一附属医院